Kỹ Thuật Western Blotting: Phát hiện chính xác protein mục tiêu

Bạn đã bao giờ nghe đến kỹ thuật Western Blotting chưa? Đây là một kỹ thuật phổ biến trong việc phát hiện protein, được sử dụng rộng rãi trong nghiên cứu sinh học và y học. Trong bài viết này, chúng ta sẽ cùng tìm hiểu về nguyên lý hoạt động cũng như quy trình thực hiện của kỹ thuật Western Blotting.

Western Blot là gì?

Western Blot, hay còn được gọi là Immunoblot, là kỹ thuật sử dụng các kháng thể đặc hiệu để phát hiện các protein chuyên biệt được tách chiết từ mô hoặc tế bào. Kỹ thuật này không chỉ áp dụng cho protein, mà còn có thể được sử dụng để phát hiện virus hoặc môi trường.

Nguyên lý hoạt động của Western Blot

Western Blot sử dụng kỹ thuật điện di để phân tách các protein dựa trên kích thước (SDS-PAGE 1 chiều) hoặc kích thước và điện tích (SDS-PAGE 2 chiều). Sau đó, protein sẽ được chuyển lên màng lai và gắn với các kháng thể đặc hiệu. Nhờ kháng thể, chúng ta có thể phát hiện sự hiện diện của protein mục tiêu trên màng lai.

Quy trình thực hiện Western Blot

Quy trình thực hiện Western Blot có thể khác nhau tùy thuộc vào loại nguyên liệu đầu vào và tính chất của protein mục tiêu. Tuy nhiên, có thể tóm gọn quy trình Western Blot như sau:

  1. Xử lý mẫu để tách chiết protein mục tiêu từ mô hoặc tế bào.
  2. Điện di mẫu đã xử lý trên gel polyacrylamide để phân tách các protein.
  3. Chuyển protein đã phân tách lên màng lai, thường là màng nitrocellulose hoặc PVDF.
  4. Khóa màng bằng albumin huyết thanh bò hoặc sữa không béo để ngăn chặn liên kết không đặc hiệu của kháng thể.
  5. Kiểm tra protein bằng kháng thể, thông thường sẽ sử dụng 2 loại kháng thể: kháng thể sơ cấp và kháng thể thứ cấp.

Một số lưu ý khi thực hiện Western Blot

Khi thực hiện Western Blot, có một số điều cần lưu ý để đạt được kết quả chính xác:

  1. Xử lý mẫu:

    • Sử dụng Lysis Buffer phù hợp với vị trí của protein mục tiêu.
    • Thực hiện xử lý mẫu ở nhiệt độ thấp và bảo vệ protein sau khi ly giải tế bào.
    • Định lượng protein bằng phương pháp phù hợp.
  2. Điện di mẫu trên gel:

    • Sử dụng chứng dương và thang protein để kiểm tra kỹ thuật điện di.
    • Chuyển protein lên màng ngay sau quá trình điện di.
  3. Chuyển protein lên màng và nhuộm:

    • Không sử dụng thuốc nhuộm Coomassie.
    • Chuyển màng theo phương pháp ướt hoặc bán khô.
    • Loại bỏ muối khỏi gel điện di trước khi chuyển màng.
    • Chọn phương pháp khóa màng phù hợp.

Sản phẩm cho Western Blot do GeneSmart cung cấp

GeneSmart cung cấp các sản phẩm hỗ trợ cho kỹ thuật Western Blot, bao gồm các hệ thống Western Blotting với tín hiệu phát quang hóa học – ChemiLITE ECL Western Blotting Package và ChemiPRO ECL Western Blotting Package. Hai hệ thống này đều được trang bị đầy đủ thiết bị và hóa chất cần thiết, giúp bạn thực hiện Western Blot một cách chính xác và hiệu quả.

Để biết thêm thông tin chi tiết về sản phẩm, bạn có thể truy cập website của GeneSmart tại địa chỉ Copy Paste Tool.

Ảnh minh họa:
Western Blotting

Hình ảnh: Hệ thống ChemiLITE ECL Western Blotting Package

Western Blotting

Hình ảnh: Hệ thống ChemiPRO ECL Western Blotting Package

Đó là tất cả những điều cơ bản về kỹ thuật Western Blotting mà bạn cần biết. Hy vọng bài viết này đã giúp bạn hiểu rõ hơn về kỹ thuật này và hiệu quả của nó trong nghiên cứu sinh học và y học.